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高效液相色谱仪实验方法的建立过程

来源:未知      发布日期:2018-12-12 09:16    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪实验方法的建立过程



     建立好高效液相色谱仪的实验方法,对于指导色谱系统的维护和故障排除是十分有益的。本文仅提示液相色谱方法建立的过程。

      深圳市亿鑫仪器设备有限公司是一家以研发、生产、销售品管检测仪器及实验室试验仪器设备为主体的高新技术企业;主要产品涵盖高效液相色谱仪、气相色谱仪、气相质谱联用仪,原子吸收分光光度计,紫外分光光度计、精密分析天平、光谱仪、ROHS检测仪、水质分析仪、测量仪器、化学分析仪器、金相显微镜,物理测量仪器、无损探伤仪、蓝光三维扫描仪、高精度三坐标、二次元、试验机及实验室常用仪器仪表等多种产品的大型专业精密仪器仪表

建立高效液相色谱仪方法有以下几步:

选择合适的液相色谱方法;
选择合适的色谱柱;
选择合适的 k ′值的条件;
选择良好的峰位;
选择良好的色谱柱条件;
用实测样品解决出现的特殊问题;
证实方法的正确性。
      选择高效液相色谱仪方法应由样品所决定。典型的小分子混合物可用反相 HPLC、离子对 HPLC 和正相 HPLC 方法试验。这三种方法有的可能不理想,不妨都试试。如是酸性组分,首先是选用反相色谱,再用离子对色谱,最后才试正相色谱。开始建立某种方法时,可能选柱的范围比较广,包括柱长、粒径和柱填料的性质等。一般开始时采用的方法是比较通用的,选择反相 HPLC,15cm 长的十八烷基键合相柱(5μm)。每个液相色谱工作者手头应配有 C 18 键合相柱、硅胶柱、腈基柱和氨基柱等几种类型的色谱柱,以便在建立方法时随意换用。现在流行的径向加压柱,在初建方法时很适用,因为它能以不同的长度串接在一起。
        选择溶剂强度配制成合适的流动相可以提供理想的 k ′值。一个有经验的高效液相色谱仪工作者会控制在 1< k ′<10 的范围(特殊情况下也允许 0.5< k ′<20)。如果有良好的 R 值,短的分析时间,高的 N 值,往往能够检测出窄的色谱峰。可以作为液相色谱流动相使用的溶剂有 100 多种,但实用的只有少数几种。在实验室中有了甲醇、乙腈、水、四氢呋喃、正乙烷、二氯甲烷,就能够解决 90%以上的色谱分离问题。改变峰位(a 值)在反相色谱中常用两种“活性”溶剂──甲醇、乙腈和四氢呋喃。不同溶剂配比会影响分离效果,再用第三种溶剂调节流动相强度(反相液相色谱用水),充分显示出流动相的多样性和灵活性。
       色谱柱和流动相确定后,为了获得满意的色谱分离,可进一步选择柱长、粒径和流速等。需要指出的是某些样品在进样前要进行很完全的预处理,另外,许多样品则需要进行梯度洗脱,当色谱条件有所改变时,需要寻找更合适的分离条件。
       最后,需要强调的是所有这些讨论的前提是所建立的高效液相色谱仪方法必须满足精密度、准确度要求,并建立实验室之间方法实施的严格标准。对于选择方法的准确度和精密度有特定要求时,严格控制常规操作尤其重要。



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