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10T梯度高效液相色谱仪操作指南

来源:未知      发布日期:2018-12-17 10:31    |     分享    加入收藏   关注:
10T梯度高效液相色谱仪操作指南


本文详细介绍一下10T型梯度高效液相色谱仪的具体操作步骤,是由深圳市亿鑫仪器设备有限公司提供。

梯度洗脱称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。
原理: 流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k,并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离
特点:提高柱效改善检测器的灵敏度。当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
优点:1.缩短分析周期;2.提高分离能力;3.峰型得到改善,检少拖尾;4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。梯度洗脱适合分析组分复杂且用不易分离的组分。

B. 梯度系统
一.对系统的认识
1. 系统构成:10T梯度系统由10T高压恒流泵,高压静态混合器,10T紫外检测器,10T溶剂托盘,进样阀,色谱柱,色谱工作站七个主要单元组成。
2. 各单元的功能
10T高压恒流泵:为系统提供流量恒定,高压的流动相。流量恒定是系统稳定的必要条件,高压主要是提高分离的效率,可极大的缩短实验时间。
高压静态混合器:使不同流动相均匀,快速的混合,同时尽量减少溶解热,混合脉动和系统死体积。
10T紫外检测器:根据化合物对光的吸收规律,将光的变化转化为电信号,进而转化为数字信号或模拟信号。
10T溶剂托盘做为溶剂瓶和配件存放。
进样阀:待检测样品由进样阀加载到系统中。
色谱柱:提供分离混合物所需的固定相。混合物流经色谱柱时,与流动相,色谱柱里填充的固定相发生系列的物理作用,由于各组分在色谱柱里面的迁移速率不同,这样当它们流出色谱柱时,各组分得到分离。
色谱工作站:采集检测器生成的信号,将信号转化成数据谱图,根据需求对信号进行不同的处理。
3.系统运转的基本流程:由泵输出的高压,速度恒定的流动相,将进样阀样品定量环中的样品,携带到色谱柱,在色谱柱里面得到分离,分离后的组分经过检测器流通池时,检测器产生可供分析的信号传输到工作站,工作站依托电脑进行系列的数据处理,完成基本的定量和定性任务,以及检测所需的其他任务。
二. 常规的操作过程
1. 开机:依次打开泵,检测器和电脑的电源。系统各模块的电源开关在仪器的正面,电源线接头在仪器的背面。(打开电源要果断,一次到位。防止高频率的反复开关电源,这样会造成仪器主板的损坏。)
2. 确认色谱柱是否适合分析当前的样品。国标,行业标准和其他文献提供的分析方法上都会标注使用什么样的色谱柱。常用色谱柱有C18,C8,氨基柱,硅胶柱,氰基柱等等。(色谱柱是有方向的,更换柱子时要注意液体的流向应跟柱子标签上箭头的指向一致。更换柱子时要注意拧好接头,以防止漏液和尽量减小接头产生的死体积。)
3. 将流动相换成分析当前样品所需的流动相。更换流动相时先将不锈钢滤头用新的流动相淋洗一下,然后将滤头放到装有新流动相的瓶子里,用手捏住溶剂管,轻轻的抖动滤头,以赶走滤头里的部分气泡。接下来打开泵的排空阀,用新流动相冲洗两分钟左右。(更换流动相时要特别注意:当前后两种流动相是互不相溶的流动相时,需要用一种中间流动相过渡。当流速是1.0ml/min时,该过程至少是30min。例如,当流动相由甲醇换成带有磷酸盐的溶液时,需要用10%的甲醇水溶液过渡,反之亦然。)
4. 启动泵。
(1)排空。步骤:打开排空阀(将排空阀逆时针旋转180度),确认排空废液管出口在废液瓶里,按下排空按钮(“Purge”键)。在泵的进液管和排空管看不到气泡的情况下,延续2min后停止排空, 按“Purge”键,泵停止运行后关紧排空阀。(注意:当进液管里面没有任何液体时,需用洗耳球或者大针筒将液体吸入泵头后,先1.0ml/min运行片刻,当有液体抽出后,再进行排空操作,这样可延长泵头密封圈和柱塞杆的使用寿命。)
(2)设定流速。步骤:按下“func”键,当光标在流速处闪烁时,按数字键输入所需的流速,通常按数字键“1”。在显示屏显示的流速为设定的流速时,按“Enter”确认流速的输入,然后按“pump”启动泵,此时运行灯亮,泵压会逐渐上升。当泵压稳定(压力波动不超过50psi),检测器废液管有废液流出时,可认为泵运行正常, 泵启动完成。
5. 设定波长。按检测器的“λ”,当光标在显示屏的波长处闪烁时,按数字键输入想要的波长,当显示屏上的波长显示正确后,按“Enter”确认波长的输入, 按“Ce”返回主界面。
说明:4,5两项的操作亦可通过软件在电脑上设置,其操作比用面板操作更加简单,且可保存为仪器方法供以后调用。其详细操作见“6”
6. 启动工作站,进行相关的设定。
(1)启动:点电脑桌面上的快捷方式“” ,弹出主界面
 
 
 
(2)登录仪器,进行相关设置。按图1所示进行点击,出现仪器登录界面
            
出厂设置的默认用户账号为Admin,密码为a12345。点击“确定”即可登录到仪器
A. 设置仪器方法,参照色谱工作站操作章程:设置用户角色、登录权限、仪器配置、项目管理、实验方法、进样操作以及谱图处理和打印。
注:10T高效液相色谱仪系统,可实现软件对于硬件的反控,如针对于泵的流量设置,启动,停止及排空等,检测器的波长设定,归零等。梯度程序的设置及调用,在仪器登录后界面—文件—新建配置文件,泵模块下方可以编辑梯度程序,
如:梯度程序  0-10   A:10          B: 90
                      10-15   A: 10-25   B: 90-75
编辑如下:初始   A: 10   B: 90
                     10   A: 10   B: 90
                     15   A: 25   B: 75
编辑完成以后,保存方法文件,方便以后直接调用。
B.设置进样序列。点“单针”,依次对谱图保存路径,采样时长,仪器配置文件,谱图处理文件和是否打印进行设置。(注意:单针使用前,重置列状态)
C.点击“数据采集”。进入数据采集界面,即可查看当前基线的状态,待基线水平后,就可进样。

7. 进样。(1)进样前先用流动相清洗进样阀,清洗液体积在1ml以上。
               (2)进样前用流动相洗针至少六次以上,然后再用样品洗针三次以上。
               (3)切记在“Load”位置推进样针的活塞,然后将进样阀手柄转动到“Inject”位置。要注意不要将气泡推入进样阀。为确保有较好的重现性,要求进样体积是定量环体积的3倍以上。为了便于以后比较谱图,通常在推活塞之前按一下检测器上的调零按钮“zero”。
               (4)采样过程中,点击“快照”,可实时查看峰处理结果。采样接束后可在“谱图处理”中打开谱图,在进行相关处理后,点击“预览”可查看处理结果,点击“打印”可将处理结果转换成纸质报告。
8. 结束实验。结束实验时将流动相换成色谱甲醇,(置换流动相时要注意溶剂的互溶性,其操作与上述3中流动相的更换相同),以1.0ml/min,流速冲洗系统至少30min其操作与上述3中流动相的更换相同。冲洗完成后关掉电源,顺序是先检测器后泵。
9. 色谱柱的保养:我们要根据不同的情况对色谱柱进行保养:
①反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用色谱甲醇冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。
②长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
10.单向阀的清洗。仪器使用一段时间后,由于流动相中微小杂质, 日常维护冲洗不完全等,仪器抽不上液体(直观表现就是压力上不去,没有液体抽出),这时主要原因就是单向阀的堵塞。解决方法:用1/4-5/16扳手,逆时针旋转拆下管路,用活动扳手拆下阀座,取出单向阀。可用10%甲醇水超声清洗;用异丙醇超声清洗;用5%—10%稀硝酸溶液超声清洗,二次蒸馏水超声洗脱酸等。安装注意:单向阀是有方向的,安装前可以用洗耳球吹下,辨别方向后安装复原即可,拧紧接口密封处,防止漏液。
11.  关于微小颗粒。微小颗粒不在我们肉眼的观察范围之内,但它是液相系统的大敌,是造成液相系统堵塞的主要原因。如果微小颗粒未得到有效的控制,它还会加剧泵头密封件和进样阀密封件的磨损,极大的影响到这些关键部件的寿命。所以液相系统中采用了很多方法来有效控制微小颗粒的存在。10T液相系统跟其他的液相系统一样,要求流动相在进入色谱系统之前,需经过0.45um的滤膜过滤当流动相由有机物组成时,要用有机系滤膜;当流动相由无机物组成时,要用水系滤膜;当流动相由有机物和无机物共同组成时,要用混合膜。滤膜的选型和质量对过滤效果至关重要,如果选型不对或者选择了质量不好的滤膜,会起反作用。此外,样品在注入进样阀之前,需经过0.22um的针式过滤器过滤。针式过滤器的选型规则同上述滤膜的选型规则一致,质量同样也很关键。
12.  关于气泡。气泡对泵压的稳定,色谱柱的性能,检测器信号的稳定都有相当大的危害,跟对微小颗粒一样,液相色谱系统采用各种方式防止气泡的产生。
(1)动相在进入色谱系统前要经过充分脱气,最常用的是超声波脱气,效果较好的有真空脱气和氦气脱气。(2)在抽取样品时,如果进样针中产生了气泡,要将气泡排除后再进样,如不能排除气泡,则考虑重新抽取样品。(3)如果流通池中易产生气泡,需在流通池的出口加一背压阀,在流通池中形成一定的压力,这样可有效防止气泡的形成。
 
三. 常见故障及处理方法
现象一. 不锈钢滤头浸在流动相中,但泵抽不上流动相压力显示很低或压力显示为零。
原因:1.泵头有大量空气,泵密封性能不好-------检查各接头是否拧紧,用吸耳球或适配器从排空管出口将流动相吸出。
     2. 单向阀故障----------取出单向阀,用10%的,经0.45um滤膜过滤的硝酸或者磷酸溶液超声清洗10min,换重蒸馏水超声清洗后,将单向阀装回去。在此时要注意单向阀的方向,如果方向装反了,同样抽不出液体。
     3.密封件严重磨损。-------联系深圳市亿鑫仪器设备有限公司,更换密封件。
客服热线13823202331.
     4. 其他原因--------------联系深圳市亿鑫仪器设备有限公司,客服热线
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现象二. 泵压不稳。当泵压的波动超过100psi时,会引起基线的波动,这时我们需要稳定泵压。其产生的原因和解决的方法同现象一
现象三. 泵头结合部,清洗孔有渗漏。
原因:泵在运行过程中,泵头密封圈和柱塞杆之间在不断的进行往复运动。在运动过程中,两者相互摩擦,互有磨损。这种磨损到达一定的程度,就会出现上述现象。----------联系深圳市亿鑫仪器设备有限公司,更换柱塞杆或密封圈,通常先更换密封圈。客服热线
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现象四. 系统在正常运行过程中,在不进样的情况下,有峰出现。
原因 1.系统接地不良,峰由静电干扰产生。--------检查系统接地情况,保证地线接触良好。
        2.流通池中有气泡产生---------在流通池的出口施加间断的反压,可使流通池中的气泡排出;在流通池出口加一反压阀,可有效抑制流通池气泡的产生。
        3. 其他原因-----------------------联系深圳市亿鑫仪器设备有限公司,客服热线
13823202331.
现象五. 在使用液相时,偶尔有触电的感觉。
原因:1,系统与大地接触不良--------------检查电源线是否接地,若未接地,可让电工师傅帮忙接根地线,将系统与大地导通。
          2,系统各模块之间导电性能不好-------用万用表测试模块之间的导电性能,将导电性能不好的连接处重新连接
四.特别提醒:
使用者须保证电源有良好的接地,如果电源接地不良,可用导线将系统与大地接通。因地线接触不良或者是客户端供电系统引起的损坏不在本公司责任范围之内



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