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高效液相色谱仪色谱柱的故障排除和保养

来源:未知      发布日期:2019-01-04 09:21    |     分享    加入收藏   关注:

高效液相色谱仪色谱柱的故障排除和保养



       众所周知,色谱柱是高效液相色谱仪的核心,选择合适的色谱柱能大大提高分离效果,平时保养好色谱柱能够延长和提高高效液相色谱仪的使用寿命,本文就介绍一下色谱柱的故障排除和保养知识。

1.高效液相色谱仪色谱柱是否可以反冲

  一般的正相反相柱应该都能反冲,只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲,不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉,反冲后还是正着用比较好,以免柱子的两头都被污染,要点:正向使用,反向冲洗。

2.高效液相色谱仪新色谱柱的活化

   新柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为,分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单,多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。

  如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。用待测物对新柱平衡,目的是:将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

3.高效液相色谱仪柱子取下来放置一段时间,需要保护

  对一般的反相柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发,应该不需要做特殊的保护。

4.
高效液相色谱仪预柱或保护柱用还是不用

  加上保护柱,肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞,肯定有害于分离度和柱效,因为保护柱中间有着死体积的存在但是如果保护柱接得好并且尽量控制其匹配性和经常更换,分离度和柱效应该影响并不大。

5.高效液相色谱仪反冲色谱柱的方法,不连检测器

  反冲就是将柱子反向连到系统中。因为,有污染物反冲出来,当然不连检测器,出液端直接接到废液瓶就可以。

6.高效液相色谱仪正相硅胶柱一般保存在什么溶剂里面比较合适

  短期和长期都建议保存在正相测定所用的流动相中,一般是正己烷和极少量的异丙醇。

7.高效液相色谱仪苯基柱,氰基柱该什么时候考虑用?

  苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测定时,具有较高的选择性。CN柱可作为一个保留能力最弱的反相柱使用,也可作为一个活性降低的正相柱使用(保留时间比硅胶柱和氨基柱低很多)。

8.高效液相色谱仪同样类型柱子还有长度,粒径等差异,这些该怎么去选择?

  长度和粒径都是用来改变柱效的,选择原则是够用就好。

9.高效液相色谱仪普通的C18柱能作为正相色谱柱使用吗?正相色谱体系中最常用也最普通的是那种色谱柱。正相柱在使用过程中与反向柱相比有什么需要注意的地方?

  普通C18柱作为正相柱使用,我还没听说过。正相色谱分离模式是指固定相的极性比流动相的极性大,反过来,流动相极性大就是反相。C18固定相属于疏水性相对比较强的,疏水性强就是极性很弱,应该找不出极性比它更弱的流动相了。

  正相体系常见的柱子有:硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱,最普通的应该就是硅胶柱。正相柱和反相柱比,最需要注意的是水分,正相柱对水分非常敏感,流动相中水分含量的些微变化对保留时间影响很大,因此正相柱测定前平衡时间需要几个小时甚至更长。

10. 高效液相色谱仪CN柱的保存需要在低温条件,但是,又不能太低,使固定相冻结,怎么控制这个温度?怎么判断固定相是否被冻结?固定相冻结后会是什么样的现象?

  所谓低温储存,就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室。储存液只要不是纯水,冰点都比较低,纯甲醇的冰点是零下90度以下了。

11.我们测试样品时,经常会关心柱压是否太高,但是在购买色谱柱时,并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是多少?针对这样的情况,用户怎么判断柱压是否超过该柱的极限?

  装柱时的压力比使用时高很多,所以柱压对色谱柱本身在使用时没有极限问题存在,倒是一般仪器有个40Mpa的上限。如果色谱分离度还能满足分析方法要求,柱压只要仪器能承受就OK吧。

12.高效液相色谱仪C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?pH在2左右。

  pH=2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失,包括:C18和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐,如果,不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,也不bi过份担心,最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱,因此减少几天的使用寿命吧;有缓冲盐就麻烦一点,保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出,对柱子损伤很大。

13.高效液相色谱仪色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?还有所谓的死体积怎么测定呢?

  色谱柱安装技巧不多,只要接头和柱头匹配,确实拧紧不漏就可以了,但也要注意不要拧得太紧以至于损伤螺纹。所谓死体积就是完全不保留的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积,一般用极性非常强的尿嘧啶的出峰来测定。死体积包括柱体积(色谱柱内溶剂能占据的空腔体积)和柱外体积两部分。

14. 高效液相色谱仪CN基柱应该怎样维护才好呢?比如,做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂保存、长期用什么溶剂保存等。

  CN可作正相柱,也可作反相柱用,除了保存溶剂有特殊要求外,其它维护办法和一般正相和反相柱没有多大区别。

15.在用液相色谱同时分离多种组分时,怎么通过条件色谱条件使各个峰达到比较理想的分离效果!

  这是方法开发的大问题。方法开发建立,要做的就是:针对分析物和基体的情况不同,选择色谱柱类型和分析条件,包括流动相溶剂类型、组成比例、pH值、温度和流速等参数的确定。这方面的问题,要讲起来内容非常多。

16.哪些原因会造成色谱峰变宽、峰高变低,有哪些解决办法?

  如果其它色谱条件没有改变,柱效下降是导致峰变宽的主要原因。对于易电离的极性物质,如果流动相pH选择不合适,分析物既有中性分子态存在,又有离子态存在,峰也会变宽变矮。

  高效液相色谱仪色谱柱使用后柱效逐步下降是正常现象,如突然降低则属异常。柱效下降原因有很多,但柱效快速下降则多半是使用不当,造成填料特性或柱床结构改变所致。如超过使用pH范围造成的固定相和硅胶基体的流失、柱床塌陷等;还有强保留物质吸附在填料表面,形成非特异性吸附层,完全改变了原有固定相的表面活性和分离性能,使柱效下降;另外进样时的压力脉冲,也会破坏柱床结构影响柱效。



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