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紫外分光光度计测定保健食品中总黄酮含量

来源:未知      发布日期:2019-08-09 08:44    |     分享    加入收藏   关注:
紫外分光光度计测定保健食品中总黄酮含量


1 范围
本方法适用于以含黄酮类成分为主要原料的保健食品中总黄酮含量的测定。
 
2 原理
试样经预处理除杂后,以甲醇或60%乙醇溶液提取黄酮类成分。试样中的黄酮类成分可被亚硝酸钠还原,与硝酸铝生成络合物,在氢氧化钠溶液碱性条件下开环,生成 2-羟基查耳酮而使溶液显特征的橙红色,采用紫外分光光度计在510nm波长处测定吸光度,以芦丁为对照品,采用标准曲线法计算样品中总黄酮的含量。
 
3  试剂
注:除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的一级水。
3.1  5%亚硝酸钠溶液:称取5g亚硝酸钠(NaNO₂),加水溶解成100mL。
3.2  10%硝酸铝溶液:称取硝酸铝(Al(NO3)3•9H2O)10g,加水溶解成100mL。
3.3  氢氧化钠试液:取氢氧化钠(NaOH)4.3g,加水溶解成100mL。
3.4  石油醚(60~90℃)。
3.5  乙醇(CH3CH2OH)。
3.6  甲醇(CH3OH)。
3.7  芦丁对照品溶液: 取芦丁对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,制成浓度为0.2mg/mL的对照品溶液。
 
4 仪器
4.1 紫外分光光度计
4.2 超声波提取器。
4.3 离心机。
4.4 分析天平:感量1mg,0.1mg。
 
5 分析步骤
5.1  试样处理(试样取样量、供试液取样体积可根据试样中总黄酮的含量适当调整,以保证测定的吸收度值在0.3~0.7范围内)
5.1.1 固体与软胶囊试样:精密称取固体试样粉末或软胶囊内容物0.4g(M),置索氏提取器中,加石油醚(60~90℃)加热回流提取至提取液无色,弃去石油醚液,样渣挥去石油醚,转移至具塞锥形瓶中,精密加甲醇25mL(V1),密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷至室温,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液作为供试品溶液。
5.1.2 液体试样:精密吸取供试品2mL(M),至25mL(V1)量瓶中,加60%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
5.2 芦丁对照品标准曲线制备:精密吸取芦丁对照品溶液(3.7项)0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL,分别置25mL(V3)量瓶中,加水至6mL,加入5%亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀放置6min,加氢氧化钠试液10mL,摇匀,再加水至刻度,摇匀,放置15分钟,以0.0mL对照品溶液制得的溶剂为空白,在波长510nm处分别测定吸光度值。以吸光度为纵坐标(A),对照品浓度为横坐标(mg/mL),绘制标准曲线。
5.3  样品测定:精密吸取供试品溶液2mL(V2),至25mL量瓶中;照5.2,自加水至6mL起,……,至在510nm波长处测定吸光度,同法操作。从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮的浓度(C),计算样品中总黄酮的含量(X)。
 
6 分析结果的表述
       C×V1×V3×100
X = ————————
         V2×M×1000
式中:
X—试样中总黄酮百分含量,以芦丁(C27H30O16)计, g/100g(mL);
C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度,mg/mL;
V1—试样定容体积,mL;
V2—吸取供试液体积,mL;
V3—显色定容体积,mL;
M—试样取样量,g(mL)。
计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留三位有效数字。
 
7 精密度
同一操作者两次平行测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的: 15%(固体样品)、10%(液体样品)。
注:样品有颜色时,可采用样品标准添加法,以0号管调零,绘制标准曲线,以消除样品颜色干扰。
 
8 其他
本方法的检测限(LOD)为50ng;定量限(LOQ)200ng;
本方法的最佳线性范围(以芦丁计):9.9~59.2最佳线性范围。



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