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高效液相色谱仪测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖

来源:未知      发布日期:2019-08-29 08:54    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量



1  范围
本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠测定的方法。
 
本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定;第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。
 
2  原理
样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,采用高效液相色谱仪分离、紫外检测器检测,外标法定量。
 
3  试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB / T6682 规定的一级水。
 
3. 1  试剂
 
3. 1. 1  氨水( NH 3 · H 2 O )。
 
3. 1. 2  亚铁氰化钾[ K 4 Fe ( CN ) 6 · 3H 2 O ]。
 
3. 1. 3  乙酸锌 [ Zn ( CH 3 COO ) 2 · 2H 2 O ]。
 
3. 1. 4  无水乙醇( CH 3 CH 2 OH )。
 
3. 1. 5  正己烷( C 6 H 14 )。
 
3. 1. 6  甲醇( CH 3 OH ):色谱纯。
 
3. 1. 7  乙酸铵( CH 3 COONH 4 ):色谱纯。
 
3. 1. 8  甲酸( HCOOH ):色谱纯。
 
3. 2  试剂配制
 
3. 2. 1  氨水溶液( 1+99 ):取氨水 1mL ,加到 99mL 水中,混匀。
 
3. 2. 2  亚铁氰化钾溶液( 92g / L ):称取 106g 亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定容1000mL。
 
3. 2. 3  乙酸锌溶液( 183g / L ):称取 220g 乙酸锌溶于少量水中,加入 30 mL 冰乙酸,用水 定容至 1000mL 。
 
3. 2. 4  乙酸铵溶液( 20 mmol/ L ):称取 1.54g 乙酸铵,加入适量水溶解,用水定容至 1000 mL经0. 22 μ m 水相微孔滤膜过滤后备用。
 
3. 2. 5  甲酸 - 乙酸铵溶液( 2mmol/ L 甲酸 +20mmol / L 乙酸铵):称取 1.54g 乙酸铵,加入适量水溶解,再加入 75.2 μ L 甲酸,用水定容至 1000mL ,经 0. 22 μ m 水相微孔滤膜过滤后备用。
 
3. 3  标准品
 
3. 3. 1  苯甲酸钠( C 6 H 5 COONa , CAS 号: 532-32-1 ),纯度 ≥99. 0% ;或苯甲酸( C 6 H 5 COOH , CAS 号: 65-85-0 ),纯度 ≥99. 0% ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
 
3. 3. 2  山梨酸钾( C 6 H 7 KO 2 , CAS 号: 590-00-1 ),纯度 ≥99. 0% ;或山梨酸( C 6 H 8 O 2 , CAS 号: 110-44-
 
1 ),纯度 ≥99. 0% ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
 
3. 3. 3  糖精钠( C 6 H 4 CONNaSO 2 , CAS 号: 128-44-9 ),纯度 ≥99% ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
 
3. 4  标准溶液配制
 
3. 4. 1  苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)标准储备溶液( 1000mg / L ):分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠 0.118g 、 0. 134g 和 0.117g (精确到 0.0001g ),用水溶解并分别定容至 100mL 。于 4℃贮存,保存期为 6 个月。当使用苯甲酸和山梨酸标准品时,需要用甲醇溶解并定容。
 
注:糖精钠含结晶水,使用前需在 120℃ 烘 4h ,干燥器中冷却至室温后备用。
 
3. 4. 2  苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准中间溶液( 200mg / L ):分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各 10.0mL 于 50mL 容量瓶中,用水定容。于 4℃ 贮存,保存期为 3 个月。
 
3. 4. 3  苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准系列工作溶液:分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液 0mL 、0. 05mL 、 0. 25mL 、 0. 50mL 、 1. 00mL 、 2. 50mL 、 5. 00mL 和 10. 0mL ,用水定容至 10mL ,配制成质量浓度分别为 0 mg / L 、 1.00mg / L 、 5.00mg/ L 、10. 0 mg / L 、 20.0mg / L 、50. 0mg / L 、 100mg / L 和 200mg / L 的混合标准系列工作溶液。临用现配。
 
3. 5  材料
 
3. 5. 1  水相微孔滤膜: 0. 22 μ m 。
 
3. 5. 2  塑料离心管: 50mL 。
 
4  仪器和设备
4. 1  高效液相色谱仪:配紫外检测器。
 
4. 2  分析天平:感量为 0. 001g 和 0. 0001g 。
 
4. 3  涡旋振荡器。
 
4. 4  离心机:转速 >8000r / min 。
 
4. 5  匀浆机。
 
4. 6  恒温水浴锅。
 
4. 7  超声波发生器。
 
5  分析步骤
5. 1  试样制备
 
取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀;奶酪、黄油、巧克力等采用 50℃~60℃ 加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的 200g 装入玻璃容器中,密封,液体试样于 4℃ 保存,其他试样于 -18℃ 保存。
 
5. 2  试样提取
 
5. 2. 1  一般性试样准确称取约2g (精确到0. 001g )试样于 50mL 具塞离心管中,加水约 25mL ,涡旋混匀,于 50℃ 水浴超声 20min ,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液 2mL 和乙酸锌溶液 2mL ,混匀,于 8000r / min 离心5min ,将水相转移至 50mL 容量瓶中,于残渣中加水 20mL ,涡旋混匀后超声 5min ,于 8000r / min 离心 5min ,将水相转移到同一 50mL 容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过 0.22 μ m 滤膜,待高效液相色谱仪测定。
 
注:碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。
 
5. 2. 2  含胶基的果冻、糖果等试样
 
准确称取约2g (精确到0. 001g )试样于 50mL 具塞离心管中,加水约 25mL ,涡旋混匀,于 70℃ 水浴加热溶解试样,于 50℃ 水浴超声 20min ,之后的操作同 5.2. 1 。
 
5. 2. 3  油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样准确称取约 2g (精确到 0.001g )试样于 50mL 具塞离心管中,加正己烷 10mL,于 60℃ 水浴加热约 5min ,并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液( 1+99 ) 25mL ,乙醇 1mL ,涡旋混匀,于 50℃ 水浴超声 20min ,冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液 2mL 和乙酸锌溶液 2mL ,混匀,于 8000r / min 离心5min ,弃去有机相,水相转移至 50mL 容量瓶中,残渣同 5. 2. 1 再提取一次后测定。
 
5. 3  仪器参考条件
 
5. 3. 1  色谱柱: C 18 柱,柱长 250mm ,内径 4. 6mm ,粒径 5 μ m ,或等效色谱柱。
 
5. 3. 2  流动相:甲醇 + 乙酸铵溶液 =5+95 。
 
5. 3. 3  流速: 1mL / min 。
 
5. 3. 4  检测波长: 230nm 。
 
5. 3. 5  进样量: 10 μ L 。
 
注:当存在干扰峰或需要辅助定性时,可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇 + 甲酸 - 乙酸铵溶液 =8+92  。
 
5. 4  标准曲线的制作
 
将混合标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
 
5. 5  试样溶液的测定
 
将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到峰面积,根据标准曲线得到待测液中苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的质量浓度。
 
​6  分析结果的表述
试样中苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的含量按式(1 )计算:
 
…………………………( 1 )
 
式中:
 
X———试样中待测组分含量,单位为克每千克(g/kg);
 
ρ———由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/ L );
 
V———试样定容体积,单位为毫升( mL );
 
m———试样质量,单位为克(g );
 
1000 ———由mg/kg转换为 g /kg的换算因子。
 
结果保留 3 位有效数字


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