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高效液相色谱仪测定茶叶中咖啡碱含量

来源:未知      发布日期:2019-09-06 14:07    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定茶叶中咖啡碱含量



1 原理
茶叶中咖啡碱经沸水和氧化镁混合提取后,经高效液相色谱仪、C18分离柱、紫外检测器检测,与标准系列比较定量。 
 
2 仪器 和用具 
实验室常规仪器及下列各项:
 
2.1 高效液相色谱仪。 
 
2.2 紫外检测器:检测波长 280 nm 
 
2.3 分析柱:C18 (ODS柱)。 
 
2.4 分析天平:感量 0. 000 1 kg
 
3 试剂和溶液 
甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水。 
 
3.1  氧化镁:分析纯。 
 
3.2 高效液相色谱仪流动相:取 600mL甲醇倒人 1400ml,重蒸馏水,混匀,脱气。
 
3. 3 咖啡碱标准液:称取 125mg咖啡碱(纯度不低于 99%)加乙醇 :水(1:4)溶解,定容至 250ml。
 
使用时,待标准液至室温后,取 2ml工加水至 100mL作为工作液。 
 
4 操作方法 
4.1 取样 
 
 按 GB/T 8302的规定。 
 
4.2 试样制备 
 
按 GB/T 8303的规定。 
 
4.3 测定步骤 
 
4.3.1 试液制备
 
称取 1.0g(准确至0. 0001 g)磨碎茶样,置于500ml,烧瓶中.加4.5g氧化镁及300ml沸水,于沸水浴中加热,浸提 20min每隔5min摇动一次),浸提完毕后立即趁热减压过滤,滤液移入500mL容量瓶中,冷却后,用水定容至刻度,混匀。取一部分试液,通过。0.45um滤膜过滤,待用 。
 
4.3.2 色谱条件 
 
4.3.2.1 检测波长:紫外检测器,波长 280nm。
 
4.3.2.2 流动相:水:甲醇的体积分数为 7:3。
 
4.3.2.3 流速:0.5mL/min一1.5mL/min 
 
4.3.2.4 柱温;40 C。 
 
4.3.2. 5 进样量:10 uL~20ul
 
4.3.3 测定 
 
准确吸取制备液10uL-20ul,注人高效液相色谱仪,并用咖啡碱标准液制作标准曲线,进行色谱测定。
 
5 结果计算  
 比较试样和标准样的峰面积,按式(1)计算:
 
​……… … (1) 
 
式中:
 
C1一 一测定液中咖啡碱含量ug; 
 
L1一 一样品总体积mL; 
 
L2— 进样体积uL; 
 
M 一一试验的质量,g; 
 
m1.— 试样干物质含量,% 。
 
取两次测定的算术平均值作为结果,结果保留小数点后一位。
 


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