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高效液相色谱仪测定葡萄籽提取物中原花青素的

来源:未知      发布日期:2019-09-08 12:52    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定葡萄籽提取物中原花青素的含量



以葡萄籽提取物为原料 ,采用经预处 理的AB- 8 型大孔树脂吸附纯化,以不同浓度的乙醇进行梯度洗脱,洗脱液经真空干燥的原花青素固体;采用高效液相色谱仪对分级产物进行定性、定量分析。
 
1. 液相色谱条件 
流动相:A 为 2%冰醋酸;B为乙腈∶水∶冰醋酸(80∶19.6∶0.4);
 
检测波长:280 nm;
 
流速:1.0 mL/min;
 
色谱柱:反相 C18 柱;
 
梯度程序见下表 。
2. 对照品测定 
精密称取原花青素标准品约 50mg,置 10 mL 棕色容量瓶中,加入 50%乙醇,超声溶解放冷至室温,定容,摇匀,配制成原花青素 5mg/mL 的对照品溶液。过 0.45 μm 滤膜,10μL 进样进行 高效液相色谱仪分析。
 
3.样品制备
将预处理好的 AB- 8 型大孔吸附树脂装入色谱柱中,将已知浓度原花青素样品溶液以适宜的流速加入色谱柱,分批收集流出液,并采用香草醛 -硫酸法测定其浓度。待流出液浓度达到样品液浓度 1/10 时 , 停 止 加 样 , 用 4 倍 柱 床 体 积 (BV)的去离子水以 2 BV/h 的流速洗柱子;洗完后依次用体积分数为 20%、30%、40%、50%、60%的乙醇对原花青素进行梯度洗脱,洗脱流速 2 BV/h, 各 4 BV,分批收集各流出液,进行真空干燥得到不同浓度乙醇洗脱条件下的成品。
 
4.样品检测及含量测定
​精密称取不同浓度乙醇洗脱条件下(20%、30%、40%、50%、60% )的成品各约50 mg 置 10 mL 棕色容量瓶中,加入 50%乙醇,超声溶解放冷至室温,定容,摇匀,过 0.45 μm 滤膜,10 μL 进样进行高效液相色谱仪分析,通过原花青素标准谱图判断不同浓度乙醇洗脱液中低聚体、高聚体的存在状况。
 
5.含量测定 
结合原花青素标准谱图和高效液相色谱仪分析结果,对不同浓度乙醇洗脱液中 OPC含量测定。


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