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高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量

来源:未知      发布日期:2019-09-16 09:39    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定苹果酒中苹果酸及乳酸含量



本文系统研究了苹果酒有机酸的高效液相色谱仪分析法,对色谱柱的型号、流动相的配比、流速、检测波长等色谱条件进行了优化 。
 
1、实验材料
实验室自制的苹果酒样品;L苹果酸(色谱纯);L一乳酸(色谱纯);L一苹果酸(分析纯) ;甲醇 (色谱 纯) ;甲酸(色谱纯 )。
 
2、实验仪器
分析天平0.1mg;
 
漩涡混合器 ;
 
数控超声波清洗器 ;
 
循环式多用真空泵 ;
 
高效液相色谱仪 ,配紫外检测器 ;
 
pH计 。
 
3、样品预处理
将苹果酒样品在室温静置平衡后 ,先经滤纸过滤 ,再经0.45um微孔滤膜过滤,稀释 3.3倍 ,直接进样 。
 
4、仪器及其条件
色谱柱:C18 (3.5um X4.6mm ×75mm );
 
柱温:25℃ ;
 
流动相:0.1%甲酸 + 3%甲醇 ,使用前经过0.45um混合纤维树脂膜抽真空过滤 ;
 
流速 :0.5mL/min ;
 
进样量 :20ul;
 
检测波长:210nm 。
 
有机酸定性:将苹果酒提取液色谱图与苹果酸、乳酸标准品色谱图进行对照,根据保留时间初步确定苹果酒中有机酸种类,同时用加样外标法和光谱图数据进行辅助定性
 
有机酸定量:配制L一苹果酸和L一乳酸的混合标液作为母液,依次稀释得到6个浓度 (苹果酸5000、4000 、3000、2000、 1000 和 500mg/L ;乳酸 2000 、 1500、 1000 、500、 200 和 100mg/L )。
 
各浓度梯度的混合标样按照高效液相色谱仪分析条件进行实验,每个水平点重复进样3次,以峰面积 (Y) 对质量浓度(X,mg/L)作图,绘制出标准曲线 。
 
5、色谱柱的选择
在苹果酒的有机酸高效液相色谱仪检测中,重要的是优选有机酸的色谱分离条件,这些条件涉及 色谱柱型号 、流动相配比、流速 、检测波长等 。
 
液相色谱柱是高效液相色谱仪的分离系统,在混合物中各组分准确定性定量方面起着重要的作用,为了使苹果酒在高效液相色谱仪上有良好的分离效果,首先对使用的色谱柱进行了优选 。
 
​本实验选 用了3 种型号的柱子 ,即
 
①C18柱 ,5um ×4.6mm× 250mm ;
 
② T3柱,5um × 4.6mm ×250mm;
 
③ C18柱,3.5um ×4.6mm ×75mm 。
 
以苹果酸一乳酸混合标样及自制苹果酒为样品考察了3 种柱子的分离效果,在相同的洗脱程序下进行测试,得到的色谱图,在相同的分析时间下T3 柱具有更好的分离效果;而考虑分离效果近似的情况下 ,C18柱能在最短的时间内将苹果酸和乳酸有效分离,只需12min即可分析一个样品。这是由于所 的 C18 柱(3.5um ×4.6mm ×75mm) 是一种快速分离色谱柱 ,该柱颗粒粒径比普通柱要小,为 3.5um 。快速分离柱高效液相色谱仪与传统高效液相色谱仪相比,具有分离时问短 ,分析速度快,流动相消耗小,分析成本低等优点。为高效地完成测试工作,本研究在各峰分离效果较好的前提条 件下,尽可能让所需的分离时间缩短,因此我们最终选择了 C18(3.5um ×4.6mm ×75mm) 柱作为实验用分析柱 


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