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高效液相色谱仪测定山楂中的有机酸含量

来源:未知      发布日期:2019-09-17 10:38    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定山楂中的有机酸含量



本文利用高效液相色谱仪对山楂中几种水溶性有机酸进行了分析,结果稳定,可靠,可为山楂的质量控制提供参考。
 
1、 仪器与试剂
高效液相色谱仪,配紫外检测器、柱温箱、及自动进样器组成。
 
酒石酸、草酸、苹果酸、抗坏血酸、柠檬酸、琥珀酸等有机酸对照品均为分析纯;
 
磷酸二氢钠及磷酸为分析纯;
 
水为高纯水;
 
流动相经0.45um 滤膜过滤。
 
2、 对照品及供试品溶液的制备
准确称取各有机酸对照品适量(草酸 12.5mg,酒石酸25mg,苹果酸50mg,抗坏血酸5mg,柠檬酸250mg,琥珀酸5mg),加50mL水溶解,采用逐级稀释法配成一系列浓度的混合标样;
 
准确称取山楂样品粉末(过 0.45mm孔径筛)约1g,置小烧杯中加适量水,超声提取0.5h,过滤后定容于50mL容量瓶中,取适量过0.45um滤膜,制成供试品溶液。
 
3、 色谱条件
色谱柱:ODS2(4.6mmX250mm,5um);
 
流动相:磷酸二氢钠-磷酸缓冲液(pH=2. 6);
 
流速:0.8mL/min;
 
检测波长:210nm;
 
柱温:25℃;
 
进样量:10uL。
 
4、实验条件优化
采用纯水提取法提取水溶性有机酸,提取效率高,方法简便,药典中规定方法是室温浸泡,所需时间比较长。
 
本实验采用超声提取法,分别考察了 20、30、40min 的提取率。实验结果表明,超声时间太短,有些物质未提取出来或提取不充分,提取时间太长,色谱图又没有明显差异,因此,根据色谱峰个数、峰面积及经济角度,提取时间以 30 min 为佳。
 
对水溶性有机酸的分离,无需有机相仅有水相即可获得满意的分离效果,而且在这种条件下,对色谱柱也没有损害。但是,通常情况下,流动相中需要加入酸抑制剂调节 pH值来抑制有机酸的解离。
 
流动相 pH值较低时对硅胶柱的键合相不利,且对柱子损害较大,而流动相 pH>3 时,峰基本无分离。因此,本实验选择流动相 pH值为 2. 6。在本实验的有机酸检测波长 210nm下,甲酸和乙酸自身的紫外吸收会干扰有机酸的测定,而磷酸盐缓冲液在紫外区几乎无吸收,选择磷酸二氢钠和磷酸缓冲体系调节pH值;流速较大时出峰时间差别较小且分离效果较差,本实验确定流速为 0. 8 mL/ min。


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