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高效液相色谱仪测定原料乳与乳制品中三聚氰胺

来源:未知      发布日期:2019-09-21 14:06    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定原料乳与乳制品中三聚氰胺含量


1、原理
试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用高效液相色谱仪测定,外标法定量。
 
2、试剂与材料
除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
 
2.1 甲醇:色谱纯。
 
2.2 乙腈:色谱纯。
 
2.3 氨水:含量为25%~28%。
 
2.4 三氯乙酸。
 
2.5 柠檬酸。
 
2.6 辛烷磺酸钠:色谱纯。
 
2.7 甲醇水溶液:准确量取 50 mL 甲醇和 50 mL 水,混匀后备用。
 
​2.8 三氯乙酸溶液(1%):准确称取10 g 三氯乙酸于1 L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后备用。
 
2.9 氨化甲醇溶液(5%):准确量取 5 mL 氨水和 95 mL 甲醇,混匀后备用。
 
​2.10 离子对试剂缓冲液:准确称取 2.10 g 柠檬酸和 2.16 g 辛烷磺酸钠,加入约 980 mL 水溶解,调节 pH 至 3.0 后,定容至 1L 备用。
 
2.11 三聚氰胺标准品:CAS 108-78-01,纯度大于 99.0%。
 
​2.12 三聚氰胺标准储备液:准确称取 100 mg(精确到 0.1 mg)三聚氰胺标准品于 100 mL 容量瓶中,用甲醇水溶液溶解并定容至刻度,配制成浓度为 1 mg/mL 的标准储备液,于 4℃避光保存。
 
​2.13 阳离子交换固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱,基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60 mg,3 mL,或相当者。使用前依次用 3 mL 甲醇、5 mL 水活化。
 
2.14 定性滤纸。
 
2.15 海砂:化学纯,粒度0.65 mm~0.85 mm,二氧化硅(SiO 2 )含量为99%。
 
2.16 微孔滤膜:0.2 µm,有机相。
 
2.17 氮气:纯度大于等于 99.999%。
 
3、仪器和设备
3.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器。
 
3.2 分析天平:感量为0.0001 g和0.01 g。
 
3.3 离心机:转速不低于 4000 r/min。
 
3.4 超声波水浴。
 
3.5 固相萃取装置。
 
3.6 氮气吹干仪。
 
3.7 涡旋混合器。
 
3.8 具塞塑料离心管:50 mL。
 
3.9 研钵。
 
4、样品处理
4.1 提取
 
​4.1.1 液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等:称取2 g (精确至0.01 g)试样于50 mL具塞塑料离心管中,加入15 mL三氯乙酸溶液和 5 mL乙腈,超声提取10 min,再振荡提取10 min后,以不低于4000 r/min离心10 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25 mL,移取5 mL滤液,加入5 mL水混匀后做待净化液。
 
​4.1.2 奶酪、奶油和巧克力等:称取2 g(精确至0.01 g)试样于研钵中,加入适量海砂(试样质量的4倍~6倍)研磨成干粉状,转移至50 mL具塞塑料离心管中,用15 mL三氯乙酸溶液分数次清洗研钵,清洗液转入离心管中 ,再往离心管中加入5 mL乙腈,余下操作同4.1.1中“超声提取10 min,加入5 mL水混匀后做待净化液”。
 
注:若样品中脂肪含量较高,可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化 。
 
4.2 净化
 
将4.1中的待净化液转移至固相萃取柱中。依次用 3 mL水和3 mL甲醇洗涤,抽至近干 后 ,用6 mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于 0.4 g 样品)用 1 mL流动相定容,涡旋混合1 min ,过微孔滤膜后,供HPLC测定。
 
5、高效液相色谱仪测定
 
5.1 高效液相色谱仪参考条件
 
a) 色谱柱:C 8 柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相当者;
 
                 C 18 柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相当者。
 
b) 流动相:C 8 柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(85+15,体积比),混匀。
 
                 C 18 柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(90+10,体积比),混匀。
 
c) 流 速:1.0 mL/min。
 
d) 柱 温:40℃。
 
e) 波 长:240 nm。
 
f) 进样量:20 μL。
 
5.2 标准曲线的绘制
 
用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为 0.8、2、20、40、80 μg/mL 的标准工作液 ,浓度由低到高进样检测,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。基质匹配加标三聚氰胺的样品。
 
​5.3 定量测定
 
待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。
 
5.4 结果计算
 
试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算获得:
 
…………………… (1)
 
式中:
 
X —— 试样中三聚氰胺的含量,单位为毫克每千克(mg/kg );
 
A —— 样液中三聚氰胺的峰面积;
 
c —— 标准溶液中三聚氰胺的浓度,单位为微克每毫升(µg/mL );
 
V —— 样液最终定容体积,单位为毫升(mL );
 
A s —— 标准溶液中三聚氰胺的峰面积;
 
m —— 试样的质量,单位为克(g );
 
f —— 稀释倍数。


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