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高效液相色谱仪测定豆油中脂肪酸的含量

来源:未知      发布日期:2019-09-27 09:37    |     分享    加入收藏   关注:
高效液相色谱仪测定豆油中脂肪酸的含量


本文介绍甩高效液相色谱仪分析豆油中脂肪酸组成的方法。油脂经皂化后 ,不需萃取,直接形成脂肪酸的苯乙酮醑,通过梯度淋洗。使分离时间大大缩短。 此方法可以直接应用到生物样品。
 
一、仪器和试剂
高效液相色谱仪,配紫外检 测器。
 
擦榈酸> 99%,
 
花生酸 > 99%,
 
硬 脂 酸> 99.5%,
 
亚 油 酸> 99%,
 
亚 麻 酸> 99%,
 
油酸> 99,
 
∞-溴代苯乙酮 (CP ), 使用前用正 戊烷重结晶。
 
三乙胺 (cC P ),使用前重蒸馏纯化。其他试剂均为A R 级。
 
二、标准样的制备
称取棕榈酸,油酸,亚油酸,亚麻酸各0.015g,硬脂酸0.005g,花生酸 0.001g 混合于10ml正巳烷中。取0.3ml混合披,经氮气吹干浓缩后,以酚酞为指示剂,用0.1mol/L KOH乙醇溶液中和至终点,并再次在N :下吹千,留待酯化。
 
三、样品的前处理
取0.05ml 豆油,加5ml  0.5mol/L KOH 乙醇溶液回流30min。取0.3ml 冷却液,以酚酞为指示剂,用盐酸乙醇 (4:1 V /V ) 溶液中和到终点, 并在氮气下吹干留待酯化。
 
四、酯化
标准样和豆油样品经上述处理后,加入0.2ml ∞一溴代苯乙酮的丙酮溶液(12mg/ml)及0.2ml兰乙胺的丙酮溶液 (10mg/ml),回流 10min后所得脂肪酸∞一溴代苯乙酮酯混合液即可直接进行高效液相色谱仪分析。
 
五、高效液相色谱仪分析条件
ODS柱:4.6×150mm 
 
柱温:室温
 
波长:254nm
 
流动相: 甲醇-水-高氯酸 (85-14.75-0.25) 为开始淋洗液,13min 后,淋洗液变为100% 甲醇至分离结束。
 
流速:2mL/min。
 
谱图用峰高法定量。


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